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本周焦点 ELISA实验操作失败的主要原因
发布时间:2020-05-07   点击次数:55次

我們知道,ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢驗中除正常反應外,有時常可見到一些錯誤結果(即假陽性或假陰性),那麽致使實驗不成功的主要原因有哪些咧?下面我們一起來看看公司爲大家推薦的技術,本周焦點:ELISA實驗操作失敗的主要原因。
   
*,標本受細菌汙染:因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌汙染的標本同溶血標本一樣,亦可産生非特異性顯色而幹擾測定結果。

第二,标本的影响:溶血标本及混有红細胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红細胞或血红蛋白中的亚铁血红素),在洗涤过程中往往难以完全洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。   

第三,標本凝固不全:在工作中,有時爲了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集後必須使其充分凝固後再分離血清。

第四,标本保存不当:在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性;为克服上述干扰,ELISA試劑盒测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。

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